1. 紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈，開(kāi)啟超凈臺(tái)正常工作狀態(tài)，用酒精消毒操作者的雙手。

2. 將所需的培養(yǎng)基確保瓶身干凈后放于工作臺(tái)面內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈，將培養(yǎng)基瓶口用酒精棉球擦拭后，再將瓶口對(duì)準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次，旋開(kāi)瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋，分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上，瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈，且放在距離酒精燈最近的位置，瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。

3. 取1個(gè)高壓后的新培養(yǎng)瓶，瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開(kāi)后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次分別放于酒精燈兩側(cè)，把保種管在超凈臺(tái)外用酒精棉球擦拭下2/3后拿進(jìn)超凈臺(tái)內(nèi)在酒精燈上消毒保種管口2-3次放于臺(tái)面左手邊，取1ml移液器快速移動(dòng)在酒精燈上消毒1-2次，然后再裝上槍頭吸取保種管內(nèi)的細(xì)胞液，懸空移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。

4. 拿出1支高壓后的5ml定量移液管，在酒精燈上灼燒尾部后裝于電動(dòng)移液器上，再次放于酒精燈上灼燒整個(gè)定量移液管管身2-3次，懸空進(jìn)入培養(yǎng)基瓶?jī)?nèi)吸取4ml培養(yǎng)基再懸空移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，將培養(yǎng)瓶瓶口和瓶蓋在酒精燈上消毒2-3次后擰緊平放，在瓶身做好實(shí)驗(yàn)標(biāo)記。

5. 將培養(yǎng)基瓶口和瓶蓋消毒2-3次后擰緊，熄滅酒精燈，整理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，取出實(shí)驗(yàn)試劑及污缸等，關(guān)閉超凈工作臺(tái)。

6. 將培養(yǎng)瓶放于28℃,5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，旋開(kāi)瓶口少許。注意整個(gè)培養(yǎng)箱底托盤內(nèi)一定要放高壓后的水，且定期更換確保無(wú)菌。

 在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10-12h，瓶蓋擰緊后拿出培養(yǎng)箱，置于熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞貼壁情況，及細(xì)胞形態(tài)。最后更換培養(yǎng)液。