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糖類分析方法
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作者:henobio
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發(fā)布時(shí)間: 2014-12-25
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糖類分析方法
絕大多數(shù)的糖類物質(zhì)無紫外吸收，所以不能很好地使用UV檢測器測定。其檢測手段目前常見的主要有以下三種。1．示差折光檢測器RI
RI是一種通用型檢測器，具有廣泛的使用范圍，它對(duì)沒有紫外吸收的物質(zhì)，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等都能夠檢測。RI還適用于流動(dòng)相紫外吸收本底大，不適于紫外吸收檢測的體系。在凝膠色譜中RI是必不可少的，尤其是對(duì)聚合物分子量分布的測定。利用GPC+RI+標(biāo)準(zhǔn)品，我們可以得到被測物質(zhì)的相對(duì)分子量。
日本Shodex公司的SHODEX? RI-101檢測器是一種新概念示差折光檢測器， 它使用微處理器，使得從溶液置換到基線穩(wěn)定核查能夠自動(dòng)進(jìn)行，穩(wěn)定快速。Shodex?RI-101與以往不同的高效液相色譜用示差折光檢測器相比，具有以下的特長：
* 優(yōu)越的操作性：獨(dú)特的快速平衡功能，在30分鐘內(nèi)自動(dòng)平衡基線。檢測器配備彩色液晶顯示器， 易于分析人員一眼就看到操作狀態(tài)和基線傾向；自動(dòng)啟動(dòng)功能，使之可自動(dòng)進(jìn)行從參比池的溶液置換到基線穩(wěn)定性核查的復(fù)雜操作；用幫助功能，很容易確定和校對(duì)裝置。
* 出眾的穩(wěn)定性：通過溫度調(diào)節(jié)方式的最優(yōu)化，電源打開后穩(wěn)定化時(shí)間縮短，并可獲得出眾的基線穩(wěn)定性。
* 安全措施：檢測器配備泄漏感應(yīng)器，萬一溶劑泄漏，泵可以自動(dòng)停止。
* 多種自動(dòng)功能：檢測器設(shè)有外部輸入輸出端子以及RS232C通道端口，把檢測器與各種液相色譜組合能實(shí)現(xiàn)高度自動(dòng)化。
* 由于快速自動(dòng)啟動(dòng)功能，達(dá)到穩(wěn)定時(shí)間被減半。檢測器穩(wěn)定可在彩色顯示器上自動(dòng)測定核查。
2.粘度檢測器
高聚物溶液中的[η]與分子量之間存在著以下定量關(guān)系：
3．光散射檢測器（LS）
光散射技術(shù)測定高聚物的重均分子量（按分子重量統(tǒng)計(jì)平均得到的分子量），是當(dāng)前應(yīng)用較為廣泛的一種方法。凝膠色譜分離－光散射檢測器的結(jié)合不但可以直接測量大分子的絕對(duì)分子量及分布，還可以得到分子形狀、動(dòng)力學(xué)半徑、枝化度等信息。
美國PD公司的PD2000系列的光散射完全與70年代的小角光散射和80年代的多角光散射不同。小角光散射是忽略角度，只進(jìn)行濃度外推。多角光散射是忽略濃度。PD的光散射利用得拜公式，用角度和濃度同時(shí)參與計(jì)算。PD2000家族的儀器提供溶液中的聚合物和生物高分子新的精確的數(shù)據(jù)——絕對(duì)分子量、尺寸、形態(tài)和其他的特征參數(shù)。
它具有以下優(yōu)點(diǎn)：
①高靈敏度；
②極好的重復(fù)性；
③高精度；
④易于操作；
⑤快速從復(fù)以前的試驗(yàn)結(jié)果；
⑥易于拆卸清洗；
⑦長期穩(wěn)定工作；
⑧較小的池體積（10微升），與RI聯(lián)用引起峰加寬效應(yīng)??；
⑨采用聚焦光路，可以將散射體積見到最小，得到很高的信噪比。
其適用范圍涉及：
1)仿生學(xué)和醫(yī)藥；
2)塑料和其他的聚合物；
3)蛋白質(zhì)和多糖類；
4)油漆和涂料；
5)石油化學(xué)制品；
6)潤滑油；
7)添加物 ；
8)食品生產(chǎn)；
9)環(huán)保等，政府，并且其他實(shí)驗(yàn)室。
最新分離測試技術(shù)
除了常見的HPLC分離模式之外，現(xiàn)在又新興起了場流分離色譜（FFF），也可以用來進(jìn)行多糖的分離。非對(duì)稱場流分離色譜（AF4）屬于FFF家族的一員，是一個(gè)新的、有效快速分離和準(zhǔn)確描述不同的粒子和大分子的方法。它最早在幾年前在文獻(xiàn)上有報(bào)道，是一個(gè)新的與色譜類似的分離技術(shù)，分離范圍用來從103到1012道爾頓。
德國POSTNOVA公司HRFFF 10.000系列非對(duì)稱場流分離色譜是以非對(duì)稱場流分析原理為基礎(chǔ)來工作的，是一項(xiàng)用來分離和表征流體中粒子和大分子的新穎和有效率的分離方法，它是世界上最早的全自動(dòng)化AF4系統(tǒng)。該系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的配置包括不同的泵、檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器等。10.000系列系統(tǒng)能通過樣品分子尺寸大小的差異來實(shí)現(xiàn)分離并檢測分子量、Rg、Rh等。其應(yīng)用范圍包括生物技術(shù)、多糖、藥物、蛋白質(zhì)、抗體、環(huán)境科學(xué)、材料科學(xué)等。
HRFFF 10.000優(yōu)勢包括：
* 不使用固定相，分離迅速準(zhǔn)確
* 直接進(jìn)樣，沒有必要的樣品預(yù)處理步驟
* 適用于不同的分離條件水相和有機(jī)溶劑，分子量和尺寸測定范圍大且容易得到
* 快速分離復(fù)雜的聚合物、粒子和膠體體系
* 分離中小的作用力能保護(hù)樣品的生物活性